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混合研磨仪在苯酚-硫酸法测多糖中的前处理应用探讨









应用行业

食品药品、农业、生物、医学、法医检验等

测定原理:

多糖在浓硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,再以比色法测定

所需试剂:

1. 浓硫酸:分析纯,95.5%

2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。

3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。

5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25TCA475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

操作步骤:

1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.40.60.81.01.21.41.61.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,沸水浴显色15min以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。

2.样品含量测定:

①取样品1(湿样),置于10ml PTFE密封离心管中,加入5mm3mm氧化锆磨球,加15%TCA溶液(注意:总的溶液不要超出10毫升,不要超出离心管的容量)将每个适配器上均装满6个编号的10ml带液PTFE离心管,TJ2011高通量混合研磨仪设定转速1400rpm,研磨时间3min(视物料软硬情况定,一般不超过5min

②离心,转速3000/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。蕞后滤液保持18毫升左右(TJ2011高通量混合研磨仪能量大,速度快,动植物组织会在3min之内全部打碎,不存在大残渣,直接离心即可,避免了二次转移产生污染)

③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。

定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。